1

+7(727) 227-36-36

Микробиологическая диагностика сепсиса

Автор: Д.Уразбаева - Доктор медицинских наук, заместитель исполнительного директора   Hak medical  по вопросам лаборатории г.Алматы, С. К. Бисимбаева, Н. В. Калина, Б. Д. Бекибаева, А. К. Балтабаева, Б. Т. Жакипбаева

Актуальность проблемы сепсиса связана с тем, что летальность при этой патологии остается очень высокой, иногда достигая 50% случаев. Она зависит во многом от вида вызвавшего его микроорганизма. Так, летальность больных грамотрицательным сепсисом в два раза выше летальности больных сепсисом, вызванным грамположительной флорой  [1].

В США ежегодно регистрируется более 700 000 случаев сепсиса, из них от 10 000 до 30 000 - со смертельным исходом 0 [2]. В Европе лечение одного случая сепсиса в отделении интенсивной терапии оценивается в 70-90 тысяч долларов, а последующего реабилитационного лечения в течение года - 100-250 тысяч долларов.
Этиологическая картина сепсиса динамично изменяется. Так, подавляющее значение грамотрицательной флоры в развитии сепсиса, характерное для 70-80-х гг., в настоящее время сменяется грамположительной флорой. Процесс этот характерен для всех стран. Для диагностики сепсиса проводится микробиологическое исследование крови из периферических вен. Обязательным условием является забор крови до начала антибактериальной терапии. При необходимости анализа на фоне лечения кровь отбирают непосредственно перед очередной инъекцией антибиотика в момент наименьшей концентрации препарата в крови. Кровь предпочтительно отбирать в момент подъема температуры тела. Для получения достоверных результатов необходимо получать достаточное количество материала. Поскольку количество бактерий в 1 мл крови всегда незначительно, очень важно взять необходимый объем крови: у взрослых – 10 мл, у детей – 2-4 мл, у новорожденных и детей неонатального периода 1-2 мл [3, 4, 5].
Необходимым минимумом забора являются две пробы, взятые из разных рук с интервалом в 30 минут. Оптимальным является забор трех проб крови, что существенно повышает вероятность выявления возбудителя.
В АО «Республиканский диагностический центр» (РДЦ) исследование крови на стерильность проводится с 2009 г. Забор осуществляется обученными медицинскими сестрами со строгим соблюдением правил асептики. Поверхность кожи трехкратно обрабатывают растворами антисептиков. При неэффективности первой венопункции проводят смену иглы перед повторной.
Кровь забирают шприцем одноразового использования и засевают в питательную среду. В РДЦ исследование гемокультуры проводят с использованием автоматического анализатора BacT/ALERT 3D (BioMerieux), поэтому используются стандартные флаконы BacT/ALERT с готовыми питательными средами, а не флаконы со средами, приготовленными в лаборатории. Среды лабораторного приготовления недостаточно стандартизованы и частота выделения микроорганизмов из крови при их использовании существенно ниже. При открывании крышки флакона и внесении образца крови из шприца существует опасность контаминации питательной среды микрофлорой извне. Кроме того, во флаконах BacT/ALERT создается отрицательное давление, что обеспечивает поступление строго определенного количества крови больного без контакта с окружающей средой. Используются флаконы для выделения аэробных, анаэробных бактерий, а также педиатрические флаконы для исследования крови на гемокультуру у детей.
Автоматический анализатор BacT/ALERT 3D (BioMerieux) - это один из надежных приборов, использующих технологию гемокультур для получения быстрого и достоверного результата. Инкубирование штаммов происходит в режиме шейкера. Установленный в РДЦ анализатор имеет две инкубационные секции, позволяющие анализировать 120 флаконов одновременно. BacT/ALERT 3D использует колориметрический метод, в основе которого лежит способность некоторых красителей менять цвет при изменении рН. Такой сенсор находится в основании каждого флакона.
Микробиологический анализ крови на стерильность занимает 7 суток с момента забора крови во флаконы, установки их в анализаторе до роста культуры. Если роста микробов во флаконах нет, то через 7 дней флаконы выбрасываются. Исследуемый образец крови вносится во флакон, который помещается в одну из ячеек анализатора. Присутствующие в образце микроорганизмы во время роста на питательной среде выделяют углекислый газ, который диффундирует через избирательно проницаемую мембрану и взаимодействует с сенсором. Изменение рН в ходе этого взаимодействия приводит к смене цвета сенсора с темно-зеленого на желтый. Малейшее изменение цвета улавливается высокочувствительными датчиками (измерение проводится каждые 10 минут), установленными в основании каждой ячейки с флаконами, преобразовывается в электрический сигнал, усиливается и передается в компьютер для анализа. О выявлении положительного флакона анализатор оповещает пятью возможными способами одновременно: свечение контрольной лампочки возле соответствующей ячейки, звуковой сигнал, загорание индикатора на контрольной панели прибора, печатный отчет и сообщение на экране монитора. Это позволяет очень оперативно и без потерь времени получать
результаты анализа.

Как только будет обнаружен микробный рост во флаконе, асептически шприцем берется небольшое количество бульона, готовится окрашенный по Граму мазок и исследуется на наличие микроорганизмов. В зависимости от вида выделенных микроорганизмов проводится посев на соответствующие питательные среды.

Оценку результатов посевов проводили по следующим параметрам:
– Высеяны единичные колонии - загрязнение пробы.
– Высеяно много колоний одного вида и повторно высеяны такие же микробы - высеян возбудитель.
– Идентичные микробы высеяны из крови и "очага" воспаления – высеян возбудитель.

Всего изучено 909 проб крови. Положительных высевов из исследуемого материала было 171 (18,8 ± 11,3%). Микробный рост наблюдался в течение первых суток после загрузки в анализатор большинства культур – 123 (71,9 ± 1,5%) культуры, во 2 сутки – 19 (11,1 ± 11,0%), 3 и 4 сутки – по 13 культур (5,8 ± 10,8%), 5-7 день – 6 культур (1,8 ± 10,4%). Этиологическая структура возбудителей представлена в таблице. Большинство микроорганизмов относилось к аэробной микрофлоре (97,1 ± 1,3%), анаэробов было выделено только 5 штаммов.
 
Таблица - Этиологический состав микрофлоры крови при сепсисе
 
Вид микроорганизма
 
Количество
 
%
 
Грамположительные микроорганизмы
 
1
 S. aureus 2
26
15.7
 
2
S.epidermidis
18
10.8
3
S. pyogenes
 
21
12.7
4
S.viridans
 
20
12.1
5
E. faecalis
6
 
3.6
 
Грамотрицательные микроорганизмы
 
6
E.coli
13
7.8
7
Citrobacter spp
12
7.2
8
Klebsiella spp
16
9.6
9
Enterobacter spp
15
9.1
10
P.aeruginosa
6
3.6
11
Acinetobacter
13
7.8
 
Среди культур встречались грамположительные (54,8%) и грамотрицательные изоляты (45,2%). Чаще всего высевались S.aureus (15,7%), S.pyogenes (12,7%), S.viridans (12,1%). Среди грамотрицательных возбудителей наиболее часто высевались Klebsiella spp (9,6%) и Enterobacter spp (9,1%). Наибольшие проблемы при терапии сепсиса возникали при выделении штаммов P.aeruginosa, характеризующихся множественной лекарственной устойчивостью.
Таким образом, проведенные исследования показали достаточно высокую эффективность использования автоматической системы BacT/ALERT 3D для микробиологической диагностики сепсиса.
 
Литература
1. Белобородов В. Б. Сепсис: что делать? //Медицина для всех. – 1998. – Т.11, № 5.
2. Качанко Е. Ф. , Козаченко М. Г. Карпов И. А. Антимикробная терапия при сепсисе// Медицинские новости. – 2006.- Т.2, №8.
3. Митрохин С. Д. Микробиологическая диагностика инфекций кровяного русла на современном этапе развития клинической микробиологии// Инфекции и антимикробная терапия. – 2002. – Т. 4, №1.
4. Бейкин Я. Б., Руднов В. А., Шилова В. П., Розанова С. М. Стандартные операционные процедуры: микробиологическая диагностика госпитальных инфекций// Инфекции в хирургии. – 2008. – Т. 6, №1.
5. Яковлев С. В. Программы микробиологической диагностики и антибактериальной терапии сепсиса// Инфекции и антимикробная терапия. –
2001. - Т. 3, № 3. 

Вернуться назад

Комментарии

Оставить комментарий

Пресс-центр